如何將講實驗室離心機訓練成幫手
實驗室離心機用對了是“幫手”,用錯了就是“殺手”!
就拿植物dna提取來說,原理就是去掉植物細胞壁,細胞膜,質體,線粒體,葉綠體然后剩下細胞核了,這就是我們需要的DNA。
通常采用機研磨的方法破碎植物的組織和細胞,由于植物細胞勻漿含有多種酶類(尤其是氧化酶類)對DNA的抽提產生不利的影響,在抽提緩沖液中需加入抗氧化劑或強還原劑(如巰基乙醇)以降低這些酶類的活性。在液氮中研磨,材料易于破碎,并減少研磨過程中各種酶類的作用。
十二烷基肌酸鈉、十六烷基三甲基溴化銨簡稱為CTAB、十二烷基硫酸鈉簡稱SDS,等離子型表面活性劑,能溶解細胞膜和核膜蛋白,使核蛋白解聚,從而使DNA得以游離出來。再加入苯酚和氯仿等有機溶劑,能使蛋白質變性,并使抽提液分相,因核酸(DNA、RNA)水溶性很強,經離心機離心后即可從抽提液中除去細胞碎片和大部分蛋白質。上清液中加入無水乙醇使DNA沉淀,沉淀DNA溶于TE溶液中,即得植物總DNA溶液。
雖然提取植物葉片的DNA比較簡單,用下離心機再根據植物,找段基因的序列設計引物,再順勢PCR一下了,看看個能把這段基因擴出來,整個過程其實需要用的到的設備并不多,重要的就離心機跟PCR儀器。
但是這里面需要注意的細節有很多,比如:
使用實驗室離心機的注意事項:
1. 離心機在預冷狀態時,離心機蓋必須關閉,離心結束后取出轉頭要倒置于實驗臺上,擦干腔內余水,離心機蓋處于打開狀態。
2. 轉頭在預冷時轉頭蓋可擺放在離心機的平臺上,或擺放在實驗臺上,千萬不可不擰緊浮放在轉頭上,因為一旦誤啟動,轉頭蓋就會飛出,造成事故!
3. 轉頭蓋在擰緊后一定要用手指觸摸轉頭與轉蓋之間有無縫隙,如有縫隙要擰開重新擰緊,直至確認無縫隙方可啟動離心機。
4. 在離心過程中,操作人員不得離開離心機室,一旦發生異常情況操作人員不能關電源(POWER),要按STOP 。在預冷前要填寫好離心機使用記錄。
5. 不得使用偽劣的離心使管,不得用老化、變形、有裂紋的離心管。
6. 離心機套管底部要墊棉花或試管墊。
7. 電動離心機如有噪音或機身振動時,應立即切斷電源,即時排除故障。
8. 離心管必須對稱放入套管中,防止機身振動,若只有一支樣品管另外一支要用等質量的水代替。
9. 啟動離心機時,應蓋上離心機頂蓋后,方可慢慢啟動。
10. 分離結束后,先關閉離心機,在離心機停止轉動后,方可打開離心機蓋,取出樣品,不可用外力強制其停止運動。
使用PCR儀器的注意事項:
(1)PCR儀使用的環境要恒定,工作環境的溫度不能過高或過低,最好在用空調的房間使用,有些PcR儀有溫度保護程序,在過低的溫度下機器不能啟動。
(2)電源要穩定,工作的電壓不能波動過大,波動過大會造成電子器件損壞,一般建議將PcR儀電源接于穩壓電源上。
但是要注意的是,不論是離心機還是PCR儀器,使用前都要詳細閱讀使用說明書,遇到不能解決的問題不要隨意拆卸機器,應該讓生產廠商負責售后服務的專業工程師進行處理。
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